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D-乳酸检测试剂盒[D-Lactate (Rapid) Assay Kit]

D-乳酸检测试剂盒[D-Lactate (Rapid) Assay Kit]

D-乳酸检测试剂盒[D-Lactate (Rapid) Assay Kit]
产品编号:K-DATE
分类:生物酶及检测试剂盒
品牌:Megazyme
规格:50
单价: ¥0.00

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引言: 

许多食品和饮料中都发现有D-乳酸和L-乳酸。由乳酸菌产生,D-乳酸和L-乳酸存在于牛奶的发酵产品中比如酸奶和奶酪,以及腌菜,腌肉和腌鱼中。L-乳酸被广泛添加入食品和饮料(E270)中,用作不挥发的酸化剂以增加酸味。在蛋品厂,L-乳酸可作为质量指标,如果超过了200mg/kg那么就表示存在由于污染孵化导致的腐败。类似地,也可以通过检测D-乳酸和L-乳酸含量确定牛奶和果汁的质量。在葡萄酒生产中,苹果乳酸的发酵也可以通过随后的L-苹果酸水平下降和L-乳酸水平增加监测。D-乳酸的产生标志着酒被乳酸菌腐败。在化工业中,D-乳酸和L-乳酸都是化合物生产过程中的原材料,例如聚交酯和一些可生物降解的聚合物,同时也应用在化妆品和医药品生产中。 

原理: 

D-乳酸的定量分析需要两步酶化反应。 第一个反应由D-乳酸脱氢酶(D-LDH)催化,D-乳酸在烟酰腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的存在下,被氧化成丙酮酸(1)。 

然而, 因为反应(1)的平衡和D-乳酸和NAD+有着密切的关系,进一步反应需要消耗产生的丙酮酸 在大量D-谷氨酸的存在下,通过D-谷氨酸-丙酮酸转氨酶(D-GPT)的作用把丙酮酸转化为D-丙胺酸和2-酮戊二酸(2)。 

以上两个反应中产生的 NADH 的量可以用来计量D-乳酸的量。 NADH的量通过340nm处增加的吸光率来测量。 
在相似的反应中,由L-乳酸脱氢酶(D-LDH)(3)催化,L-乳酸在烟酰腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的存在下,被氧化成丙酮酸(3) 

在大量D-谷氨酸的存在下,通过D-谷氨酸-丙酮酸转氨酶(D-GPT)的作用把丙酮酸再次被转化为D-丙胺酸和2-酮戊二酸(2)。D-乳酸和L-乳酸可以被连续测定,在这个分析方法中,它们被分别进行但它们可以同时孵育,这样就减少了总反应时间。 

特异性,灵敏度,线性和精确性 

此方法特异性检测D-乳酸和L-乳酸。在D-乳酸锂(MW=96.0)的检测中,大约可以预期结果为96%(W/W),L-乳酸锂可以得到98%(W/W)。 
检测的灵敏度为0.005 个吸光度单位。相当于样品最大体积为1.50 mL 时,样品浓度为0.107 mg/L(或者 1.60 mg/L ,样品体积0.1 mL) 。检测限为 0.214 mg/L,这是在0.010的吸光度差异,样品最大体积为1.50 mL为得到的 。 
D-乳酸和L-乳酸检测的线性变化为0.5 到 30 μg 。在重复测定中,同一份样品溶液,可能产生0.005 到 0.010 个吸光光度值的差异。这就相当于样品1.50 mL,样品溶液中D-乳酸和L-乳酸的浓度为0.107 到 0.214 mg/L 。如果样品在制备阶段被稀释过,结果要乘以稀释倍数F。如果样品制备阶段,称量过样品,比如10 g/L,可能会产生0.02 到 0.05 g/100 g 的差异。 

干扰: 

如果D-乳酸和L-乳酸的转换在实验指定的时间内(D-乳酸大约5分钟,L-乳酸大约10分钟)彻底完成,通常认为是没有发生任何干扰。不过,这个也可以进一步验证,通过在实验的完成时,向比色皿中加入D-乳酸和L-乳酸混合物(大约每0.1mL分别为15ug),吸光光度值有会明显增加。 
样品中的干扰物质的分析可以通过加入一个内参来确定。需要进行一个标准品定量回收实验,通过这个回收实验(也就是在最初的提取步骤中向样品中加入D-乳酸或L-乳酸)可以算出样品在处理和提取过程中的损失量。

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